Определение содержания гемоглобина в единице объема крови
Содержание общего гемоглобина, также как и при проведении анализа на количество эритроцитов в единице объема крови, определяется пробирочным способом и с помощью современного портативного фотоэлектрического гемоглобинометра «МиниГЕМ-523» (рис. 92). Измерение концентрации гемоглобина в крови проводится гемиглобинцианидным методом.
Для измерения концентрации гемоглобина достаточно опустить в фотометрическую ячейку прибора кювету с приготовленным раствором крови, и через мгновение на дисплее появится значение концентрации. Пересчет оптической плотности раствора в концентрацию гемоглобина производится автоматически.
Рис. 92. Портативный гемоглобинометр «МиниГЕМ-523» с автокалибровкой
Прибор не нужно включать, «прогревать», калибровать перед измерениями. При опускании кюветы в фотометрическую ячейку гемоглобинометр автоматически включается, производит измерение и индицирует измеренную концентрацию. После извлечения кюветы из фотометрической ячейки гемоглобинометр переходит в режим «ожидания» до следующего измерения.
В 10 пробирок градуированной пипеткой наливают по 2 мл заранее приготовленного 0,04%-го раствора NH3. Затем собранную в гепаринизированную пипетку Сали кровь в объеме 20 или 10 мкл выдувают в пробирки с раствором, и через 2 с уже можно проводить измерение гемоглобина.
Перед этим проверяют гемоглобинометр на точность планируемых измерений. Для этого достают специальный светофильтр (контрольная мера) с трансформирующим раствором, входящий в комплектацию гемоглобинометра, на котором указано – 133±5. Затем его вставляют в фотометрическую ячейку для измерений. На дисплее прибора должна высветиться цифра 133 или погрешность в ту или другую сторону не более 5. Если данные на дисплее прибора соответствуют цифре, указанной на контрольной мере, или цифрам в пределах погрешности, то можно проводить измерение гемоглобина.
Для этого в пустую кювету, входящую в комплектацию прибора, выливают содержимое пробирки, затем вставляют ее в фотометрическую ячейку и снимают показания прибора. В случае малого забора крови, т. е. в объеме 10 мкл, показания умножаются на 2. Содержание гемоглобина измеряется в г/л.
Содержание гемоглобина в одном эритроците
Содержание гемоглобина в одном эритроците (СГЭ) определяется по формуле Гительзона, Терскова (1956):
СГЭ = (Гемоглобин г% / Число млн эритроцитов в 1 мм3) ×10 мкмкг/эритроцит.
Определение гематокрита
Гематокрит определяют путем центрифугирования гепаринизированных капилляров с кровью в гематокритной микроцентрифуге МГ-6-02 (рис. 93а).
Микроцентрифуга (частота вращения 6500 об/мин) предназначена для одно- временного разделения крови в 6 капиллярах с целью последующего определения гематокритного числа крови.
а б в
Рис. 93. Оборудование и расходные материалы для определения гематокрита:
а – гематокритная микроцентрифуга МГ-6-02, б – гепаринизированные капилляры, в – герметик
Сбор крови для определения гематокрита осуществляется специальными гепаринизированными капиллярами, входящими в комплект микроцентрифуги. Один конец капилляра окрашен в красный цвет (рис. 93б). Заполнять капилляр кровью нужно с его прозрачного конца. В целях повышения точности измерений в
капилляр набирают как можно больше крови, при этом ее забора до конкретного объема не требуется.
Для того чтобы кровь при центрифугировании не вытекла наружу, капилляр со стороны красной отметки аккуратно, путем ввинчивания закупоривают герметиком (рис. 94в). Однако, чтобы перед закупоркой кровь случайно не вытекла из капилляра, капилляр с кровью аккуратно встряхивают вниз к красной отметке.
Закупоренные капилляры красным концом вниз в количестве 6 шт. устанавливают в ячейки. Закрывают плотно крышкой и включают меню «Пуск». Центрифуга вращается в течение 4 мин. После окончания вращения капилляры достают из центрифуги, прикладывают по одному к цифровому дисплею и снимают результаты.
Для предупреждения дисбаланса важными условиями при проведении центрифугирования являются следующие: центрифуга должна стоять на абсолютно ровном устойчивом месте, и при недоборе капилляров с кровью в пустые ячейки вставляют пустые капилляры.
Соотношение объема эритроцитов к общему объему крови вычисляется в %.
