В целях определения морфологического состава периферической крови рыб изготавливаются мазки. Схема их изготовления проиллюстрирована на рис. 94.
Рис. 94. Схема изготовления мазка крови
Используются специально предназначенные для этих целей предметные стек- ла – они обезжирены и очень чистые. В противном случае мазок не получится, форменные элементы крови будут деформированы и в дальнейшем мазок будет нечитабельным.
У малька отсекается хвост, и капля крови, стекающая с тела малька, наносится на одну сторону предметного стекла. Для равномерного распределения капли крови по предметному стеклу используется специально подготовленное предметное стекло со шлифованным на одном его торце ребром. Это стекло со шлифованной стороны прикладывается к капле крови под углом 45º, кровь растекается по шлифованной стороне равномерно. Это же стекло с кровью равномерно проводят вперед по предметному стеклу, на которое наносится мазок.
С другой торцовой стороны мазка ставят отметки: дата проведения работ, вид рыбы, место проведения работ и т. д. (рис. 95).
Рис. 95. Правильно подготовленный мазок крови
Необходимо учитывать, что на мазке крови не должно быть много крови, так как в дальнейшем будет очень сложно идентифицировать ее форменные элементы.
Оценка морфологической картины крови проводится по 10–15 мазкам. Мазки предварительно высушиваются, а затем фиксируются и окрашиваются в растворе Май-Грюнвальда. Докрашивание препаратов проводится в краске азур-эозин по Романовскому. Зрелость клеток красной крови (уровень эритропоэза), а также соотношение форменных элементов белой крови (лейкоцитарная формула) определяются по существующим классификациям (Остроумова, 1957; Иванова, 1983). Оценка и подсчет форменных элементов крови на мазке проводятся на различных его участках по следующей схеме (рис. 96).
Рис. 96. Схема оценки форменных элементов крови на мазке
Для подсчета степени зрелости клеток эритроидного ряда считают не менее 1000 эритроцитов по всему полю мазка. Затем считают соотношение зрелых, молодых и юных форм эритроцитов (%). Для подсчета разных видов и степени зрелости лейкоцитов (полиморфноядерных лейкоцитов, моноцитов и лимфоцитов) обычно считают не менее 100 штук. В случае малого количества лейкоцитов считают все лейкоциты по всей площади мазка.
Подсчет количества лейкоцитов в единице объема крови
На зафиксированном и окрашенном мазке крови рыб сначала определяется количество лейкоцитов на 1 тыс. эритроцитов путем подсчета данных клеток при просмотре 4–6 тыс. эритроцитов. Мазок просматривают согласно схеме оценки форменных элементов крови (рис. 96).
Для подсчета общего числа лейкоцитов в единице объема крови (в 1 мкл или в 1 мм3) используется общее число эритроцитов в крови в единице ее объема (в 1 мкл или мм3) и количество эритроцитов на 1 тыс. эритроцитов.
Для подсчетов используется формула:
Х = (Kэр × Kл / 1тыс.) / 1000,
где: Х – количество лейкоцитов, шт. в 1 мм3 крови; Кэр – количество эритроцитов, шт. в 1 мм3 крови; Кл/1 тыс – усредненное количество лейкоцитов на 1 тыс. эритроцитов; 1000 – количество эритроцитов.
Пример расчета:
Количество эритроцитов, подсчитанное пробирочным способом, составило 1 100 000 шт./мм3.
Усредненное количество лейкоцитов на 1 тыс. эритроцитов при просчете 5 тыс. шт. эритроцитов составило 4,2 шт.
X = (1 100 000 × 4,2) / 1000 = 4 620 000 / 1000 = 4620 шт. лейкоцитов в 1 мм3 крови.
