Эмбрион, находящийся в икринке, в значительной мере защищен от воздействия окружающей среды. Однако резкие флуктуации факторов окружающей среды оказывают влияние на процессы его жизнедеятельности. В частности, колебания температуры воды могут изменять ежесуточную норму отложения кальция на отолите. В результате изменяется ширина и четкость полос его ежесуточных при- ростов. Манипулируя факторами окружающей среды, можно искусственно влиять на характер отложения кальция, формируя в структуре отолита набор полос, четко различимых и расположенных в определенной последовательности. Именно на этом основаны методы отолитного маркирования лососей на рыбоводных заводах. При «сухом» маркировании в качестве фактора, формирующего полосы метки, используют кратковременное выдерживание икры во влажной атмосфере с последующим возвратом к нормальным условиям инкубации. Поэтому маркирование отолитов «сухим» способом возможно лишь в течение короткого периода на ранних стадиях развития рыб, когда в слуховом канале эмбриона уже сформирован статолит (самый крупный из трех отолитов рыбы), а сам эмбрион еще находится под защитой оболочки икринки.
На отолите воздействие осушения на эмбрион отражается в виде комплекса, состоящего из темной и светлой полос, более ярких, чем полосы ежесуточного прироста. Число таких комплексов (полос метки) соответствует числу обезвоживаний инкубаторов. Ширина расстояний между полосами соответствует времени пребывания икры в воде после каждого осушения инкубаторов.
Следует помнить, что в период активных физиологических перестроек темп роста организма существенно меняется. Меняется норма суточного наслоения кальция в отолите. Соответственно, это отражается и на темпе его роста. Маркирование в такие периоды проводить не следует, так как невозможно получить метку требуемого рисунка, одинаковую для всех эмбрионов. Сами полосы меток будут различной толщины и четкости – вплоть до полного отсутствия части полос, а промежутки между ними могут быть различной ширины. Естественными марке- рами таких пороговых перестроек организма в эмбриональный период являются кольцо пигментации глаз и кольцо выклева. Поэтому перед началом маркирования следует посмотреть, завершен ли процесс формирования кольца пигментации.
К началу выклева икру обычно переносят в питомники, поэтому вероятность маркирования в период формирования кольца выклева исключена. Если же на ЛРЗ используют инкубационные аппараты типа NOPAD, где выклев эмбрионов происходит в аппарате, следует завершить маркирование до начала изменений оболочки икринки перед выклевом.
При соблюдении правильных сроков мечения метка успешно формируется в условиях, когда температура в слое икры сохраняется одинаковой как при наличии воды, так и в дни осушения икры, т. е. в условиях, исключающих влияние температуры на формирование метки.
Незначительная разница температуры (около 1ºС) в толще икры в дни обвод- нения и осушения, связанная с разницей температуры воды и воздуха в цехе, обычно не влияет на качество метки. Однако значительный градиент температуры (более 3ºС) является фактором, формирующим метку, так же как и выдерживание ее во влажной атмосфере. Наложение двух таких факторов, причем действующих несвязанно, нежелательно, поскольку это может исказить запланированную структуру метки. Поэтому в инкубаторах Аткинса расширенного типа обеспечивают протекание воды по дну так, чтобы вода не проникала к икре. В инкубаторах типа NOPAD вода должна омывать боковые стенки. Инкубаторы Аткинса ящичного типа позволяют сохранять ток воды, не проникающий к икре, только в первом из трех боксов. Практика показывает, что даже столь незначительная возможность охлаждения замедляет подъем температуры в слое икры.
При речном водоснабжении инкубационных цехов размах колебания температуры в течение суток в осенний период может достигать 3–4ºС и более. В случае резких суточных флуктуаций это также может создать эффект термического маркирования и привести к формированию лишних полос в те дни мечения, когда икра находится в воде (рис. 83).
В такой ситуации необходимо найти способ поддерживать температуру воды стабильной в течение суток или отказаться от маркирования до времени стабилизации температуры речной воды.
Рис. 83. Внеплановые (термические) полосы на отолите рыбы заводского происхождения
Формирование полосы метки
На лососевом рыбоводном заводе (ЛРЗ) икру лососевых рыб предварительно инкубируют до четкого появления пигмента в глазах эмбриона. После достижения эмбрионами стадии пигментации глаз производятся все предусмотренные рыбоводными нормативами мероприятия (переборка отходов, дезинфекционная обработка и т. д.). После этого икра должна находиться в состоянии покоя 2–3 дня в обычных условиях инкубации. За это время нужно убедиться, что кольцо пигментации глаз сформировано. При анализе структуры отолитов следует обратить особое внимание на эмбрионы, находящиеся на более ранней стадии пигментации глаз.
Маркирование проводят в соответствии с заранее разработанным графиком, осушая икру в инкубаторах обычно с суточной периодичностью. Перед сливом воды икру тщательно перемешивают, чтобы предотвратить образование слежавшихся комков и улучшения вентиляции.
В течение одного цикла мечения (когда формируется одна темная и одна светлая полоса) икра 24 ч находится в сухом состоянии (без воды, во влажной атмосфере) и 24 ч омывается водой (в нормально работающем инкубационном аппарате). Для сохранения влажной среды и предотвращения резких изменений температуры инкубационные аппараты накрывают полиэтиленовой пленкой или теплоизоляционным материалом и обеспечивают протекание воды по их дну или боковым стенкам. Температура воздуха на ЛРЗ при «сухом» способе маркирования должна приближаться к температуре воды в системе водоснабжения инкуба- торов (оптимальный для формирования четкой метки вариант) и не приближаться к пороговому для лососевых рыб уровню.
Маркирование с 12-часовой периодичностью приводит к формированию более тесно расположенных полос. Такую метку идентифицировать сложнее, если её полосы нечеткие. Этот вариант можно использовать, когда температурный фактор заведомо не может повлиять на процесс «сухого» маркирования. Чтобы убедиться в этом, следует сначала провести эксперимент на небольшом количестве икры, круглосуточно отслеживая динамику температуры воды, икры и воздуха. Однако динамика температуры каждый год отличается. Необходимо иметь значительный опыт маркирования, чтобы определить, удастся ли получить читаемую метку в конкретных условиях неустойчивой температуры. Поэтому в первые годы приме- нения «сухого» маркирования не стоит проводить его в режиме 12-часовой периодичности.
Рекомендации по проведению «сухого» маркирования
1.Перед проведением маркирования необходимо:
- провести плановые мероприятия по дезинфекции и переборке икры от отходов не менее чем за 3 дня до начала маркирования;
- убедиться, что вся икра предполагаемого к маркированию объема достигла устойчивой стадии пигментации глаз;
- отобрать около 50 экз. икринок для анализа структуры отолитов, чтобы удостовериться в окончании формирования кольца пигментации глаз;
- проверить качество переборки икры, так как в отсутствие проточной воды очаги болезнетворных микроорганизмов разрастаются ускоренными темпами.
2.Для выдерживания икры во влажной атмосфере необходимо:
- перед отключением воды произвести тщательное перемешивание икры, предотвращающее наличие слежавшихся пластов или комков икры;
- прекратить подачу воды в инкубатор;
- слить оставшуюся воду;
- в аппаратах Аткинса расширенного типа поднять шандоры аппаратов на высоту 1,5–2,0 см и закрепить их на этом уровне деревянными клинышками. В аппаратах типа NOPAD развернуть подающие воду трубки так, чтобы предотвратить доступ воды к икре при включении воды;
- включить воду, чтобы она протекала по дну первого бокса (аппараты Аткинса ящичного типа) либо всего инкубатора (аппараты Аткинса расширенного типа) или по боковым стенкам (аппараты типа NOPAD), не проникая к икре;
- накрыть каждый ящик инкубационного аппарата полиэтиленовой пленкой для сохранения влажной среды всего объема икры (в том числе всех поверхностей ящика);
- в случае если разница между температурой воды в инкубаторах и воздуха инкубационного цеха составляет более 4°С, аппараты Аткинса ящичного и расширенного типа следует накрыть коробами из теплоизоляционного материала.
3.В соответствии с графиком маркирования произвести процедуру возврата к процессу нормальной инкубации:
- снять теплоизоляционный короб и полиэтиленовую пленку с инкубатора;
- вернуть шандоры аппарата Аткинса или трубки аппарата типа NOPAD в рабочее положение;
- при наполнении ящиков инкубатора водой тщательно перемешать икру;
- отрегулировать подачу воды.
4.Повторять процедуры, начиная с пункта II (для выдерживания икры во влажной атмосфере), столько раз, сколько это предусмотрено графиком маркирования.
Если соблюдены описанные выше условия маркирования, формируется легко идентифицируемая метка.